細(xì)菌污染：細(xì)菌是一種原核細(xì)胞微生物，其大小以微米(μm)計(jì)。常見(jiàn)的污染細(xì)菌有革蘭氏陰性菌和大腸桿菌、假單胞菌等，革蘭氏陰性菌中白色葡萄球菌等比較常見(jiàn)。

一旦發(fā)生細(xì)菌污染較易發(fā)現(xiàn)，多數(shù)情況下培養(yǎng)液短期內(nèi)顏色變黃，表明有大量酸性物質(zhì)產(chǎn)生，出現(xiàn)明顯混濁現(xiàn)象；有時(shí)靜置的培養(yǎng)液液體初看不混濁，但稍加振蕩，就有很多混濁物漂起。倒置顯微鏡下觀察，可見(jiàn)培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒漂浮。必要時(shí)可取少量培養(yǎng)液涂片染色檢查以證實(shí)細(xì)菌種類(lèi)；有的培養(yǎng)液改變不明顯而又疑有污染，可取出少量培養(yǎng)液用普通肉湯接種或用未加雙抗藥物的培養(yǎng)液接種，也可取10ml細(xì)胞懸液以100rpm離心5min，沉淀中加入無(wú)抗生素的培養(yǎng)液2ml，置于37℃培養(yǎng)，24h可得結(jié)果。污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變，胞內(nèi)顆粒增多、增粗，最后變圓脫落死亡，造成試驗(yàn)失敗和細(xì)胞株(系)丟失。

看到這種，別猶豫了你的細(xì)胞被污染了，那么怎么辦呢，基本原則立馬扔掉，別擴(kuò)大污染，如果你的細(xì)胞真的十分寶貴，先用帶有雙抗的PBS反復(fù)沖洗幾遍，然后再培養(yǎng)液中加入硫酸慶大霉素、新霉素（50ug/ml）等，培養(yǎng)3天后換成帶有雙抗的培養(yǎng)液培養(yǎng)。

真菌污染：是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中最常見(jiàn)的一種，尤其在梅雨季節(jié)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)更易污染。污染培養(yǎng)細(xì)胞的多為煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。霉菌污染后多數(shù)在培養(yǎng)液中形成白色或淺黃色漂浮物。一般肉眼可見(jiàn)，較易被發(fā)現(xiàn)，短期內(nèi)培養(yǎng)液多不混濁，倒置顯微鏡下可見(jiàn)于細(xì)胞之間縱橫交錯(cuò)穿行的絲狀、管狀、及樹(shù)枝狀菌絲，并懸浮飄蕩在培養(yǎng)液中。很多菌絲在高倍鏡可見(jiàn)到有鏈狀排列的菌珠；念珠菌或酵母菌形態(tài)呈卵形，散在細(xì)胞周邊和細(xì)胞之間生長(zhǎng)。鏡下看時(shí)，要將培養(yǎng)瓶用酒精棉球擦干凈，以防止與瓶外尤其瓶底外面生長(zhǎng)的菌絲相混淆。真菌污染后，細(xì)胞生長(zhǎng)變慢，但最后由于營(yíng)養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細(xì)胞脫落死亡。

真菌污染真的不建議處理，因?yàn)殒咦尤菀罪h散，可能這瓶沒(méi)9過(guò)來(lái)，又?jǐn)U大了污染，建議預(yù)防為主，在培養(yǎng)箱的水中加入硫酸銅，就是藍(lán)色的那種東西。哎，如果你非救不可，可以采用兩性霉素B（0.25-2.5），三天后換液加入含PS的培養(yǎng)液。

支原體污染：支原體是一種大小介于細(xì)菌和病毒之間(最小直徑0．2um)并獨(dú)立生活的微生物。約有1%可通過(guò)濾菌器。支原體無(wú)細(xì)胞壁形態(tài)呈高度多形性?？蔀閳A形、絲狀或梨形。

支原體形態(tài)多變，在光境下不易看清內(nèi)部結(jié)構(gòu)。電鏡下觀察支原體膜為三層結(jié)構(gòu)。其中央有電干密度大的密集顆粒群或絲狀的中心束。支原體多吸附或散在于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。橫斷面與細(xì)胞微絨毛相似，但微絨毛電子密度比支原體小，且中央無(wú)顆粒群或中央束。

支原體污染細(xì)胞后，培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁。多數(shù)情況下細(xì)胞病理變化輕微或不顯著，細(xì)微變化也可由于傳代、換液而緩解，因此易被忽視。但個(gè)別嚴(yán)重者，可致細(xì)胞增殖緩慢，甚至從培養(yǎng)器皿脫落。

是時(shí)候展示真正的技術(shù)了！推薦大家使用MB公司的專(zhuān)li符合抗生素Zell Shield®

按照以下使用說(shuō)明對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理：

1、在每次使用Zell Shield®之前，細(xì)胞傳代時(shí)，先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法"處理好細(xì)胞，再使用加了Zell Shield®的培養(yǎng)基養(yǎng)細(xì)胞，能達(dá)到最佳的祛除支原體的效果。

2、Zell Shield®常規(guī)為-18℃保存，使用前先融化分裝，后續(xù)依舊-18℃避光保存，使用時(shí)按需融化配置。避免反復(fù)凍融。

3、Zell Shield®按1:100濃度可直接加入培養(yǎng)基（例如：500ml培養(yǎng)基中添加5ml Zell Shield®，50mL/瓶的Zell Shield®可供5L培養(yǎng)基使用）。

處理方法：Zell Shield®處理細(xì)胞

并清潔空間和器械

處理難度：

Vol.3

情景三：細(xì)胞本身就非常珍貴不能丟

有時(shí)候會(huì)遇到一些特別珍貴的細(xì)胞或是病毒樣品，即便是污染了也希望可以拯救一下，減少損失。

針對(duì)細(xì)胞不同的特性，處理方式也有些許區(qū)別：

一、短時(shí)間內(nèi)就要收樣的病毒或細(xì)胞樣品：

可以用德國(guó)MB公司的Mynox® 對(duì)樣本進(jìn)行快速清除。

它來(lái)自枯草芽孢桿菌提取物，可以特異性地與支原體膜結(jié)合，改變其通透性，能夠在2-3小時(shí)內(nèi)快速清除支原體，使用方法如下：

二、需要長(zhǎng)期培養(yǎng)、保存的樣本：

可以用Mynox® Gold對(duì)樣本進(jìn)行*清除。

它是上面Mynox®的升級(jí)版，配合自帶的「鞏固防護(hù)液」，可以在后續(xù)的培養(yǎng)中（約1個(gè)月）持續(xù)發(fā)揮殺滅支原體的作用，并預(yù)防支原體生長(zhǎng)，適合需要反復(fù)傳代、長(zhǎng)期保存的珍貴細(xì)胞，方法如下：

以上兩種方法搭配支原體環(huán)境祛除產(chǎn)品一起使用，消滅支原體更*，防止復(fù)發(fā)！

處理方法：Mynox®或Mynox® Gold

并清潔空間和器械

處理難度：

Vol.4

情景四：環(huán)境中的支原體祛除

講真，實(shí)驗(yàn)用的支原體祛除試劑屬實(shí)不便宜，為了不給支原體卷土重來(lái)的機(jī)會(huì)，最好同時(shí)把實(shí)驗(yàn)環(huán)境中的支原體也一起消滅（試驗(yàn)臺(tái)、超凈臺(tái)、培養(yǎng)箱、液氮罐、移液器），常見(jiàn)的有以下這些方法：

順便用Water Shield™把培養(yǎng)箱和水浴鍋的水槽也一并清潔了，保持水源的潔凈。

處理方法：使用專(zhuān)門(mén)的環(huán)境用支原體祛除試劑

處理難度：

雖說(shuō)現(xiàn)在市面上各種各樣的支原體清除產(chǎn)品層出不窮，但避免污染的最好方式還是注意實(shí)驗(yàn)規(guī)范以及定期清潔，最后希望大家的實(shí)驗(yàn)都順順利利，原理污染。

如果懷疑細(xì)胞被支原體污染可使用支原體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，如果確定是支原體污染可以選擇支原體去除試劑進(jìn)行處理。