原代細胞培養(yǎng)也被稱為初代培養(yǎng)，是建立細胞系的第一步。

原代細胞培養(yǎng)的應用廣泛：

1. 為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段；

2. 為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件；

3. 服務于臨床實踐，用于藥物篩選等。

其步驟包括取材→分離→培養(yǎng)和維持。

原代細胞培養(yǎng)需要一定的技巧，尤其是一些細節(jié)，不然很容易翻車，今天給大家匯總了一些原代細胞培養(yǎng)的小技巧，希望大家能有所收獲！

取材

取材是原代細胞培養(yǎng)過程中的第一步，也是至關重要。

下表為一些常見組織的取材注意事項。

 

分離

一、組織塊培養(yǎng)法

1、組織塊接種后的前3天，在觀察和移動的過程中，注意不要引起液體的振蕩。為保證組織塊附著于瓶壁上，要避免頻繁晃動。

2、加入的培養(yǎng)液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。

3、當細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞，它們產生的有毒物質會影響原代細胞的生長。

4、為促進組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。

二、貼壁型原代細胞

1、原代培養(yǎng)的分離細胞，在初次接觸體外環(huán)境時，細胞之間會互相影響，產生一些促生長的活性物質，促進彼此的存活和生長。

因此，接種密度要適宜。如果接種的細胞密度過低，細胞之間的促生長作用很小，也很難使細胞適應從體內的組織環(huán)境到被分散后進入獨立生存環(huán)境的變化過程；如果接種的細胞密度過大，會導致營養(yǎng)物質供應不足，代謝廢物積累較快需要經常換液和傳代。

2、盡快使接種的細胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功的關鍵。可以在接種后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內培養(yǎng)3h到5h，待細胞貼壁后，再補足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

三、懸浮型原代細胞

1、必須保持細胞的懸浮狀態(tài)。可以通過增加培養(yǎng)液的黏度來幫助細胞呈懸浮狀態(tài)，如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質酸復合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內加入培養(yǎng)液，以5ml為最di限度，否則攪拌時會產生氣泡對細胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快，否則既容易使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下，可以采用旋轉瓶培養(yǎng)。給懸浮培養(yǎng)的細胞換液時要注意不要吸出細胞。

2、能夠進行懸浮培養(yǎng)的細胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營養(yǎng)成分消耗大，換液時間隔一般較短。

培養(yǎng)

當原代細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，就可按照正常細胞培養(yǎng)流程進行培養(yǎng)即可。

血清在細胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻：

• 提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。

• 提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調節(jié)它們所結合的物質活力。

• 有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。

• 是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質上所需因子來源。

• 起酸堿度緩沖液作用。

• 提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。

• 參與細胞凍存。

• ......

一款優(yōu)質的血清，能成為細胞實驗的“*輔助”。

Ausbian進口特級胎牛血清與市面上其他品牌血清相比，有*優(yōu)勢：

 

1. 精選內毒素更低批次（≤3EU/ml）。是細胞典藏等重大項目十幾年的穩(wěn)定供應品牌。

2. 新批次在試用前，提供試用服務，養(yǎng)細胞更放心。

3. 每個批次產量800-2000升，試用滿意的實驗室批號優(yōu)先鎖定，保證大多數(shù)項目兩年不需換批次，細胞試驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

4. 每年按廠家生產順序，會有多批次平行供應，每個實驗室專屬批號管理，保證供貨穩(wěn)定。

5. 為Ausbian血清用戶免費提供申報支持，具有完整的檢測報告，為各類項目的申報提供支持。（同時為血清VIP用戶在支原體檢測、方法學驗證等方面，提供更多免費延伸性技術幫助）。

6. 針對特殊科研項目，可提供3-5個平行批次，讓試驗人有更多選擇空間。

7. 為Ausbian血清提供免費代儲存服務，為儲存空間不足的實驗室提供可靠的血清倉儲保護，按要求隨時發(fā)貨。

8. Ausbian血清從出廠，到實驗室，全程低溫冷鏈保護，確保血清無反復凍融。

9. 免費真品保障，每個血清瓶身加貼Viansaga®易破損防偽標簽，Ausbian品牌真品保護，逢假必究，為實驗室做好售后保障。

10. 免費無憂售后，所有實驗室簽收的Ausbian胎牛血清，從簽收日開始計算，一年之內，血清在妥善保管、未開封未融化、且不影響二次銷售的情況下，均可享受無條件退貨或換貨的售后保障。

11. 免費專業(yè)幫助，匯集近二十年，千萬個血清用戶細胞培養(yǎng)經驗，為各種細胞培養(yǎng)提供問題梳理分析，解決方案參考。

12. Ausbian品牌擁有全系列血清產品線：

特級胎牛血清、細胞治療專用胎牛血清（貨號：WS500T(紅點)），透析胎牛血清 （貨號：VS500TZ ）等多系列產品，服務更專業(yè)更精準。