隨著細(xì)胞治療等生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展，各國法規(guī)和相關(guān)機(jī)構(gòu)，也逐步加強(qiáng)了，對生物制品安全性和可靠性的監(jiān)管。其中支原體檢測，是一個關(guān)鍵項(xiàng)目。在各國藥典中均指出，可以使用經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證的核酸法，可替代培養(yǎng)法和指示細(xì)胞法，對相關(guān)生物產(chǎn)品進(jìn)行支原體檢測。因此，在進(jìn)行支原體檢測實(shí)驗(yàn)時，應(yīng)選擇通過方法學(xué)驗(yàn)證的qPCR試劑盒，兼顧靈敏度和特異性，實(shí)現(xiàn)高效且精準(zhǔn)的檢測。

如何實(shí)現(xiàn)檢測的高效與精準(zhǔn)

生物試劑，尤其是具有活性或功能的試劑，對于產(chǎn)品的劑型、儲存方法、運(yùn)輸溫度都有比較高的要求。

劑型決定了產(chǎn)品本身是否穩(wěn)定，而穩(wěn)定性又進(jìn)一步?jīng)Q定了產(chǎn)品儲存和運(yùn)輸甚至是使用方法的難易程度。穩(wěn)定性越好的產(chǎn)品，對于儲存、運(yùn)輸過程的溫度要求相對更簡單，操作難度小，產(chǎn)品則更易保留更大的活性，更容易實(shí)現(xiàn)高效且精準(zhǔn)的qPCR檢測結(jié)果。

qPCR液體試劑

用于方法驗(yàn)證的支原體檢測試劑盒以qPCR法為主。目前，市場上大多數(shù)支原體檢測類的qPCR試劑盒，其試劑多以液體劑型為主。液體液試劑的特點(diǎn)

實(shí)際生產(chǎn)、運(yùn)輸、使用過程中，液體試劑很容易發(fā)生失活的情況：

液體活性試劑需要-20℃儲存，在運(yùn)輸過程中，為了保持溫度，往往需要干冰運(yùn)輸，而干冰易揮發(fā)，增加了運(yùn)輸難度。在使用過程中，也需要先在冰上結(jié)凍，再使用，再次增加了反復(fù)凍融帶來的失活風(fēng)險(xiǎn)。

qPCR凍干粉試劑

為了克服液體試劑的缺點(diǎn)，盡可能保留生物試劑的活性不因溫度的改變而被破壞，德國MB公司的qPCR檢測試劑盒，采用了新型的凍干粉劑型。

凍干粉試劑由于去除水分，可以更好地保持物質(zhì)活性，防止微生物生長、減緩氧化反應(yīng)，相較于液體試劑更不容易失活，更適合長期保存、遠(yuǎn)距離運(yùn)輸或高靈敏度的實(shí)驗(yàn)。

穩(wěn)定性強(qiáng)：凍干粉試劑在制備過程中經(jīng)過冷凍和真空干燥處理，去除了水分，活性物質(zhì)處于“休眠狀態(tài)"，進(jìn)而有助于提高試劑的穩(wěn)定性。避免了液體試劑可能受到環(huán)境濕度、溫度等因素的影響，容易發(fā)生降解，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的缺點(diǎn)。

運(yùn)輸條件相對簡單：因此相比于液體試劑，凍干粉試劑更適合長期存儲和運(yùn)輸，對溫度的要求也寬松，4℃（冷鏈溫度：2-8℃）即可，減少了對冷凍設(shè)備的依賴，操作運(yùn)輸簡便且容錯率高，避免了液體試劑保存過程中可能引起的失活可能性。

降低污染可能性，適合長期儲存和長時間運(yùn)輸，結(jié)果更可靠：由于水分被去除，也減少了其中微生物生長繁殖的可能性，降低了試劑被微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。因此，與液體試劑相比，凍干粉試劑更適合長期保存與運(yùn)輸，進(jìn)一步提高結(jié)果的可靠性。

降低氧化反應(yīng)：水溶液的存在，容易促使一些氧化反應(yīng)的發(fā)生，從而導(dǎo)致試劑失活。凍干粉中的低水分含量有助于防止這些氧化反應(yīng)的發(fā)生，維持試劑的活性。

復(fù)溶后即可開始實(shí)驗(yàn)，易于配制：凍干粉試劑的配制相對簡單，只需加入適量的溶劑即可重新溶解。這不僅減少了操作過程中的出錯可能性，還降低了試劑的使用成本。相比之下，液體試劑的配制可能需要更多的步驟，而且容易受到人為誤差的影響。此外，凍干粉試劑無需冷藏，便于儲存和運(yùn)輸，為實(shí)驗(yàn)室提供了更靈活的管理選擇。

綜上所述，相較于液體試劑，凍干粉試劑是qPCR實(shí)驗(yàn)中更好的選擇，尤其是在支原體檢測方法驗(yàn)證這類對于實(shí)驗(yàn)靈敏度、特異性等方面有高要求的實(shí)驗(yàn)中。然而，凍干粉試劑的制作，對于工藝的要求更高，需要保證試劑的活性不在制作過程中造成損失。市面上，德國Minerva Biolabs公司，專注于支原體qPCR凍干粉試劑（Venor Gem qEP）工藝，使用時復(fù)溶即可，盡可能保持試劑的更高活性，為支原體檢測提供更穩(wěn)定準(zhǔn)確的結(jié)果，完成高靈敏度、強(qiáng)特異性的方法驗(yàn)證，遵循歐洲藥典流程要求，已幫助國內(nèi)外眾多項(xiàng)目通過方法學(xué)驗(yàn)證。